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B Zielsetzung

Ziel der Arbeit ist es, die Substratspezifität der Rho-aktivierenden Toxinen CNF1 und DNT

sowie der Gewebstransglutaminase für die Rho-Isoformen RhoA, RhoB, RhoC, Rac1, RhoG,

Cdc42, TC10 und RhoD zu untersuchen.

Mit Hilfe von in vitro Experimenten, die die Modifizierung der Rho-GTPasen nachweisen,

sollen diese Rho-GTPasen zunächst auf ihre Modifizierbarkeit durch CNF1, DNT und die

Gewebstransglutaminase getestet werden. Da bakterielle Toxine wichtige Werkzeuge in der

Erforschung der Rho-GTPasen sind und die Substratspezifität der Gewebstransglutaminase

bisher nicht bekannt ist, sollen diese Experimente einen Überblick darüber geben, welche

Rho-Isoformen Substrate dieser drei Enzyme sind.

Die Aminosäuresequenzen der Rho-GTPasen sollen untersucht werden, um Aminosäuren zu

identifizieren, die für die Substratspezifität eine Rolle spielen. Aminosäuren, die in

modifizierten und nicht modifizierten Rho-GTPasen nicht homolog sind, sollen mit Hilfe der

zielgerichteten Mutagenese ausgetauscht werden, um ihre Relevanz für die Substraterkennung

zu überprüfen. Durch die Identifizierung von für die Substratspezifität wichtigen

Aminosäuren sollen die biologischen Eigenschaften von CNF1, DNT, der

Gewebstransglutaminase und der Rho-GTPasen genauer charakterisiert werden.

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