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beweist dies, dass es im Falle der Deamidierung des getesteten Proteins zu einer

Motilitätsänderung kommt.

Dass die Aminosäure 64 in RhoA einen Einfluss auf die Deamidierung durch CNF1 hat,

wurde zunächst durch den Versuch mit den RhoA-Mutanten gezeigt. Die Mutante RhoA

E64D, die statt Glutamat an Position 64 die RhoD-Aminosäure Aspartat besitzt, zeigt nach

Inkubation mit CNF1 eine geringere Motilitätsänderung als RhoA Wildtyp, also eine

verminderte Deamidierung (Abb. D11).

Abb. D11: Deamidierung durch CNF1

Nachweis der Motilitätsänderung im SDS-Gel mit Hilfe des Westernblots; der Versuch wurde zweimal mit

gleichem Ergebnis durchgeführt;

Als nächstes wurde der Nachweis der Motilitätsänderung für die RhoD-Mutanten

durchgeführt (Abb. D12). Man erkennt auf dem SDS-Gel, dass die Mutante RhoD D76E

schneller läuft als RhoD Wildtyp. Die Doppelmutante RhoD Q75E D76E läuft im Gegensatz

zu RhoD D76E langsamer auf dem Gel, demnach wäre eine Motilitätsänderung zu erwarten,

falls RhoD D76E durch CNF1 deamidiert wird.

Nach Inkubation mit CNF1 zeigte RhoD D76E kein verändertes Laufverhalten und wird

folglich nicht deamidiert.

RhoA

Wildtyp

RhoA

E64D

RhoA

Q63E

RhoA

Q63E

E64D

deami-

diert

- + - + - + - + CNF1

RhoA

Wildtyp

RhoA

E64D

RhoA

Q63E

RhoA

Q63E

E64D

deami-

diert

- + - + - + - + CNF1

1 2 ... 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 ... 93 94

Brak uwag

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